影片設定在1998年,影片不再是只把焦點集中在愛麗絲這個角色身上,吉爾將在由安布雷拉(Umbrella)制造的僵屍潮的爆發中扮演重要角色。裏昂·肯尼迪(Leon Kennedy)也將入主,在《生化危機4》電影中就有大量來自遊戲第五代的boss,所以這次再把遊戲第四代的第一男主角裏昂帶入電影版《生化5》也算情理之中。 影片主要講述保護傘公司研發的T病毒持續侵襲地球,僅存的人類被逼到面臨人吃人的絕境。人類唯一的希望全在生化人愛麗絲身上,當她從保護傘公司的秘密實驗室裏蘇醒後,跑遍東京、紐約、華盛頓和莫斯科四地,試圖追出散播病毒的兇手。 沒想到,一連串的意外讓愛麗絲面臨真假難辨的困境,在昔日夥伴和新盟友艾達的加入下,艾莉絲該如何在天譴大限來臨前找出生路,帶領人類度過末日危機?